爽到高潮无码视频在线观看-国产成人a人亚洲精品无码-成人免费看www网址入口-精品久久久久久久免费影院-久久久免费精品re6

服務熱線:
15502280048
技術支持

您現在的位置:首頁  >  技術文章  >  問題解析:熒光定量PCR反應結束無擴增曲線

問題解析:熒光定量PCR反應結束無擴增曲線
更新時間:2024-02-29瀏覽:1726次

  問題解析:熒光定量PCR反應結束無擴增曲線


  熒光定量 PCR反應結束無擴增曲線出現這個問題的常見原因,主要可以歸結為以下幾種:

  反應循環數不夠:一般建議設置循環數為 40。

  程序中未設置信號采集步驟:注意,兩步法擴增程序一般將信號采集設置在退火延伸階段;三步法擴增程序應當將信號采集設置在 72 度延伸階段。

  引物降解:長時間未使用的引物應先通過 PAGE 電泳檢測完整性,以排除引物降解的可能性。

  模板濃度太低:這個大家減少稀釋度重復實驗就可以了,一般來說,未知濃度的樣品先從最高濃度做起。

  模板降解:無解,請重新制備模板,可以重復實驗。

  溶解曲線形狀異常

  (1)雜峰在主峰之前,Tm 約為 70 - 75℃——一般為引物二聚體


656.png


  這種情況主要有三個解決方法:

  重新設計引物;

  雜峰為引物二聚體,熒光定量 PCR引物二聚體主要是由于體系內引物與引物糾纏比引物與模板結合更容易導致的,可以嘗試提高模板濃度、退火溫度或者降低引物濃度來進行改善;

  另外,當目的基因表達量極低時,染料法容易形成引物二聚體產物影響實驗結果,此時,建議使用探針法定量。

  (2)雜峰在主峰之后,非引物二聚體

  上圖這種情況就是非特異性擴增,可能是引物特異性不好引起的,也可能是空氣中有氣溶膠污染所導致。

  大家可以先增加退火溫度再試試看,如果沒有改善,那么就需要重新更換引物啦。

  為了避免這種麻煩,BUNSEN本生小編建議大家在進行熒光定量 PCR實驗之前,就對自己的引物做一個特異性驗證。另外,每次試驗的 NTC(no template control)是一定要做的。

  (3)只有引物二聚體,無目的條帶

  如果擴增片段過短(小于 80bp),那么僅通過融解曲線就很難區分引物二聚/目的條帶。

  另外,也有可能是 熒光定量 PCR 擴增效率低或者沒有擴增,體系里邊只有引物糾纏成的二聚體了。

  總之,產物長度建議大家還是設置在 100 - 200 bp,不要太短了。

  注:以上資料僅供參考!

  熒光定量PCR 本生一直視質量控制為企業的生命,追求企業競爭力的不斷提升。公司在經營中始終秉承:遵紀守法,嚴于律己,寬仁以待,敢于承擔的企業精神作為標準,以過硬的質量和優良的服務來維護和拓展市場,較大限度的滿足客戶的需求。與客戶的共贏,是我們的發展目標。本生!您信任的合作伙伴。我們愿與您真誠合作,共創美好的未來。

本生(天津)健康科技有限公司 版權所有    備案號:津ICP備19006588號-1

技術支持:化工儀器網    管理登陸    網站地圖

聯系電話:
18502669006

微信服務號

主站蜘蛛池模板: 人妻夜夜爽天天爽三区| 天躁夜夜躁狼狠躁| 成人午夜特黄aaaaa片男男| 国产亚洲精品a在线观看下载| 桃花色综合影院| 无码人妻av免费一区二区三区| 国产精品亚洲а∨天堂网不卡 | 久久精品无码精品免费专区| 亚洲加勒比久久88色综合| 国产午夜鲁丝无码拍拍| 国产精品乱码人妻一区二区三区| 玩弄人妻少妇精品视频| 国产精品久久久久9999小说| 久久国产伦子伦精品| 曰韩a∨无码一区二区三区| 久视频精品线在线观看| 99久9在线视频 | 传媒| 国产69精品久久久久孕妇| 国外亚洲成av人片在线观看| 久久人妻公开中文字幕| 亚洲欧洲成人精品香蕉网| aa性欧美老妇人牲交免费| 18禁男女无遮挡啪啪网站| 国产亚洲日韩一区二区三区| 国产在线无码制服丝袜无码| 亚洲精品国产精品乱码不卡| 亚洲图片另类图片激情动图| 精品亚洲成在人线av无码 | 亚洲精品人妻| 国产最爽的av片在线观看| 熟女无套内射线观56| 国色天香中文字幕在线视频| 国产av丝袜一区二区三区| 色翁荡息又大又硬又粗又视频图片| 亚洲日韩国产中文其他| 亚洲日韩成人性av网站| 色欲天天婬色婬香综合网 | 久久久亚洲色| 亚洲欧美成人另类激情| 丰满少妇av无码区| 亚洲国产成人久久综合人|