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人胃促生長素(ghrelin)ELISA試劑盒實驗使用說明書
發布時間:2025/5/6瀏覽:190次
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  以下是關于人胃促生長素(Ghrelin)ELISA試劑盒的實驗使用說明綜合指南:

  一、實驗原理

  雙抗體夾心法?:采用包被抗體的微孔板捕獲樣本中的Ghrelin,通過HRP標記檢測抗體形成復合物,TMB顯色后測定OD值。

  競爭法?(部分試劑盒):樣本中Ghrelin與標記抗原競爭結合抗體,OD值與濃度呈負相關。

  二、樣本處理

  類型?:血清、血漿(EDTA/肝素抗凝)、細胞上清液、組織勻漿。

  采集要求?:

  血清/血漿:4℃下3000轉離心10-30分鐘,避免溶血。

  組織樣本:需用生理鹽水勻漿后離心取上清。

  保存?:2-8℃可存48小時,長期保存需-20℃分裝,避免反復凍融。

  三、試劑盒組成

  包被微孔板、標準品(需用蒸餾水稀釋)、HRP標記抗體、TMB底物、終止液、洗滌緩沖液(20倍濃縮需稀釋)。

  部分試劑盒含生物素化抗體及鏈霉親和素-HRP。

  四、操作步驟

  平衡試劑?:所有組分需室溫平衡15-30分鐘。

  加樣?:

  標準品梯度稀釋(如10-1280 ng/ml)。

  樣本按1:100稀釋(如10μl樣本+1ml稀釋液)。

  孵育?:37℃溫育1小時,底洗滌3-5次。

  顯色?:加入TMB底物,避光反應15分鐘,硫酸終止。

  檢測?:酶標儀450nm讀取OD值,繪制標準曲線計算濃度。

  五、注意事項

  質量控制?:板內/板間變異系數應<10%,回收率需達81%以上。

  干擾避免?:

  避免孔內液體殘留影響洗滌效果。

  底物變藍或過期不可使用。

  保存條件?:未使用試劑2-8℃保存,避免強光照射。

  六、典型數據

  檢測范圍?:0.78-50 pg/mL(競爭法)或更高濃度(夾心法)。

  靈敏度?:可達0.32 pg/mL。

  不同品牌試劑盒可能存在細節差異,建議以具體產品說明書為準。

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